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牛结节性皮肤病病毒CRISPR-Cas12a荧光法结合重组酶聚合酶扩增法 (RPA)的敏感性和特异性检测

时间:2023-08-24   访问量:1030


牛结节性皮肤病(LSD)是由牛结节性皮肤病病毒(LSDV)引起的一种烈性、传染性病毒病。为对LSD进行早期防控,本研究利用基于orf068基因的重组酶聚合酶扩增法(RPA)结合基于CRISPR-Cas12a的荧光法(RPA-Cas12a荧光法),建立了一种新的LSDV现场快速检测方法。结果显示,新建的RPA-Cas12a荧光法以质粒为模板,灵敏度可达5 copies/μL,而传统检测方法以病毒基因组DNA为模板,灵敏度为102 TCID50/mL;该方法与其他常见牛病毒无交叉反应。此外,对40份牛临床样本的现场RPA-Cas12a荧光检测结果显示,诊断灵敏度为96.3%(95%CI:810~99.9%),特异性为92.31%(95%CI:62~109.6%),与定量PCR检测结果相近。因此,本研究新建立的RPA-Cas12a荧光法在LSDV现场快速检测方面具有很好的应用前景。


原文链接:https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/35627121/










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