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项目简介：鸡马立克病病毒（MDV）、鸡传染性贫血病毒（CAV）、禽腺病毒（FADV）、禽网状内皮组织增殖病病毒（REV）、禽呼肠孤病毒（ARV）、鸡传染性法氏囊病病毒（IBDV）是较为常见的肉鸡免疫抑制病，疾病流行率处于较高水平。为了解决这一问题，建立了一种多重实时荧光定量PCR方法去检测MDV、CAV、FADV、REV、ARV、IBDV病毒。研究设计出针对MDV Meq gene、CAV VP2 gene、FADV strain 380 gene、REV gp90 gene、ARV S1 gene、IBDV VP2 gene的引物与探针，建立TaqMan探针一步法RT-qPCR法。结果发现该方法具有高效、稳定、灵敏的特点，MDV、CAV、FADV、REV、ARV、IBDV的最低检测质粒水平均能达到1 copies/µL，同时6种病毒检测方法的变异系数均＜3％，同时该方法有很强的线性关系（R2≥0.998），扩增效率为96％-104％。

这种方法的建立更符合临床实际需要。此外，本研究设计两组多重组合的实时荧光定量PCR，分别为3种DNA病毒（MDV、CAV、FADV）和3种RNA病毒（REV、ARV、IBDV），每个体系检测3个靶标，保证了扩增和荧光信号采集的同时进行。该方法满足目前市场上常见荧光定量PCR检测能力的需求，使检测检测RNA和DNA免疫抑制病更加便捷。

使用本研究方法检测仅需要1 h即可以完成6种病毒的检测，相比单一病原体检测不仅省时，而且操作简便。此外，该方法比常规RT-PCR测定法检测下限的103-105 copies/µL高1000-10000倍。尽管目前已有检测MDV、CAV、FADV、REV、ARV、IBDV的qPCR方法，但其无法完成RNA病毒一步法检测，试验步骤增加会导致污染概率升高。此外，本研究灵敏度相对于已有检测方法更高，更有利于对免疫抑制病的提前预防和筛查。

该试剂盒已经用于临床样本检测，效果明显。采集的94份临床患鸡肝脏样本进行检测后发现中CAV阳性率最高，达91.49％。在阳性样本中二重混合感染率为30.00％、三重混合感染率为37.78％、四重混合感染率为13.33％、五重混合感染率为1.11％。

需求：联合企业申报新兽药，进行成果转化。